RealHelix™ DirectFast qRT-PCR Kit는 probe 기반의 qRT-PCR 제품으로, 별도의 RNA 정제 과정 없이 동물 조직, 식물 조직 및 다양한 임상 시료(전혈, 혈청, 소변, 모근 및 swab 시료 등)를 직접 이용하여 신속한 검사를 수행하도록 디자인되었습니다. 본 제품은 고속 증폭이 가능하여 1시간 이내에 qRT-PCR 전 과정을 수행할 수 있습니다. 본 제품의 Enzyme Mix에는 역전사효소(reverse transcriptase, RTase), antibody-mediated Taq DNA 중합효소, RNase inhibitor, heat-labile uracil-DNA glycosylase(HL-UDG)가 최적화/혼합되어 있습니다. Reaction buffer에는 최적화된 buffering reagent, Mg²⁺, dUTP 및 dNTP를 포함하는 반응에 필요한 모든 성분이 포함되어 있습니다. 본 제품에 적용된 HL-UDG/dUTP 시스템은 이전 반응에서 발생한 PCR 산물에 의한 carryover contamination을 효과적으로 방지합니다.

 

Figure 1. Direct and multiplex real-time RT-PCR using the RealHelix™ DirectFast qRT-PCR Kit.

Swab lysate spiked with the 10⁸ copies of SARS-CoV-2 RNA were prepared following the protocol. 1 μl of the lysate (corresponding to approximately 10⁶ copies) and SARS-CoV-2 viral RNA (10⁶,10⁵,10⁴, 10³, and 10² copies) were analyzed using three different sets of target-specific primers and probes (S gene, ORF8, and N gene). The probes were labeled with FAM (S gene), HEX (ORF8), and Texas Red (N gene). The multiplex reaction was tested using the RealHelix™ DirectFast qRT-PCR Kit on a real-time PCR instrument, Bio-Rad CFX96.

 

 

 

 

Figure 2. Direct and fast real-time RT-PCR using RealHelix™ DirectFast qRT-PCR Kit from mouse tissues.

The lysates from mouse whole blood or liver were prepared following the protocol. Each 1 μl of lysate and purified total RNA (10, 1, 0.1, and 0.01ng) were analyzed using a mouse GAPDH gene-specific primers and probe labeled with FAM on a real-time PCR instrument, Bio-Rad CFX96.

Storage

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Shelf life

• 12 months